免疫沉淀(IP)
在細(xì)胞生物學(xué)研究中,有時(shí)要對(duì)細(xì)胞膜分子、胞內(nèi)分子或表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行定性或/和定量。但由于靶蛋白表達(dá)水乎不太高,用細(xì)胞裂解液或表達(dá)上清進(jìn)行SDS-PAGE電泳、免疫印跡(Western blot)檢測(cè)很難達(dá)到實(shí)驗(yàn)?zāi)康?。為此可用特異性識(shí)別靶蛋白的抗體進(jìn)行免疫沉淀,純化和富集靶抗原。免疫沉淀所獲得的蛋白可進(jìn)行SDS-PAGE電泳,經(jīng)考馬氏亮藍(lán)染色或銀染后觀察目的蛋白條帶。如果免疫沉淀得到的目的蛋白量低于考馬氏亮藍(lán)染色或銀染的檢測(cè)下限,可采用 Western blot檢測(cè)方法,提高檢測(cè)的靈敏度,達(dá)到實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?br/> 免疫沉淀是利用抗原蛋白和抗體特異性結(jié)合,以及細(xì)菌蛋白prorein A/G可特異地結(jié)合到抗體的FC片段的原理衍生出來的實(shí)驗(yàn)方法。目前多用預(yù)先結(jié)合了protein A/G的sepharose。免疫沉淀的成功依賴于抗原的純度以及制備抗原的難易,主要受兩方面因素的影響:1抗原原液的豐度;2抗體對(duì)抗原的親和力。有3種類型的抗體可用于免疫沉淀:多克隆抗體,混合單克隆抗體和單克隆抗體。
服務(wù)編號(hào):YKSO-009
服務(wù)內(nèi)容:
1. 樣品處理;
2. 樣品、抗體與Protein A/G sepharose孵育;
3. 抗原、抗體與Protein A/G sepharose復(fù)合物洗滌;
4. 沉淀產(chǎn)物鑒定。
樣品要求:
1. 待檢測(cè)樣品:可以是直接的待檢測(cè)蛋白樣品,也可以是細(xì)胞、組織或細(xì)菌樣品,但需收取蛋白抽提費(fèi)用;
2. 免疫沉淀用抗體;
3. 檢測(cè)用抗體。
交付材料:
檢測(cè)結(jié)果及實(shí)驗(yàn)報(bào)告。
*不同種屬來源及不同亞類的抗體與蛋白A和蛋白G的-結(jié)合力不同(表),有的甚至不能結(jié)合,如小鼠的 IgM,這類抗體不能用蛋白 A/G-agarose直接免疫沉淀