1. 電泳中,只有在恒壓的條件下電泳期間蛋白質(zhì)才可以保持恒定的遷移速率。
2. 電泳時出現(xiàn)不規(guī)則的遷移條帶的原因多是電流不穩(wěn)定。因此,要確保上下電泳槽中的電泳液與凝膠保持良好的接觸。其他可能的原因包括:加樣孔中加入的樣品太多;樣品中鹽濃度太高;邊緣效應(yīng)。在凝膠邊緣,遷移條帶出現(xiàn)“微笑”狀或樣品遷移速度減慢,可能是因為凝膠的中間比兩側(cè)更熱造成的,降低電壓有助于改善這種情況。
3. 染色和脫色一般用最短的時間已足夠。如果染色過夜,則需要更長的時間脫色。如果脫色后發(fā)現(xiàn)染色不徹底,還可以重新染色。
4. 非特異性的考馬斯亮藍(lán)染色主要是由于未溶解的染料沉積而成,應(yīng)將染料溶液過濾后使用。
5. 樣品緩沖液中煮沸的樣品可以在-20℃保存數(shù)周,但是反復(fù)凍融會導(dǎo)致蛋白質(zhì)降解。儲存在-20℃的樣品上樣前,應(yīng)該先使樣品升溫至室溫,使得SDS沉淀溶解。
6. 樣品不能沉到加樣孔底部的原因是:sample loading buffer中沒有足夠量的甘油;或梳子安放不合適,使得加樣孔底部留有聚合的丙烯酰胺。
7. 制樣過程中,如果樣品混合物變?yōu)辄S色,說明溶液太酸,應(yīng)加入NaOH調(diào)至藍(lán)色,否則樣品在電泳時會出現(xiàn)反常遷移。
8. 如果在4℃進行電泳,可以用十二烷基硫酸鋰(LiDS)替代SDS,低溫下LiDS不會沉淀。
9. 蛋白質(zhì)條帶的清晰與否取決于SDS的級別和品牌。
10. 丙烯酰胺有劇毒,可導(dǎo)致中樞神經(jīng)麻痹,也可能有致癌或致畸變的作用??杀徽Fつw吸收。如果接觸了丙烯酰胺粉末或溶液相,應(yīng)立即用肥皂水沖洗。未聚合的丙烯酰胺應(yīng)加入過量催化劑,以固體形式處理。
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