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二抗在免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)中起著舉足輕重的作用，二抗的選擇也決定了整個(gè)實(shí)驗(yàn)的成敗。實(shí)驗(yàn)中在選擇二抗時(shí)必須注意以下幾點(diǎn)：

(1)一抗種屬來(lái)源
主要根據(jù)一抗種屬來(lái)源來(lái)決定確定二抗的類型，如一抗是小鼠來(lái)源，那二抗就買抗小鼠的即可(如羊抗小鼠、兔抗小鼠等均可)。

(2)一抗類型

二抗需與一抗的類別或亞類相匹配。這通常是針對(duì)單克隆抗體而言。多克隆抗體主要是IgG類免疫球蛋白，因此相應(yīng)的二抗就是抗IgG抗體。
單克隆抗體的類別及亞類通常會(huì)在產(chǎn)品說(shuō)明書中都會(huì)有描述，如果你的一抗是小鼠IgM，那么相應(yīng)的二抗就應(yīng)當(dāng)是抗小鼠IgM。
如果單克隆一抗是小鼠IgG的某一亞類(IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3)，那么幾乎所有的抗小鼠IgG都可以與之結(jié)合，或者你也可以選擇專門針對(duì)這一亞類的二抗，例如，如果你的一抗是小鼠IgG1，那么你可以選擇抗IgG1的二抗，此種抗體在雙標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中尤其適合。
在不清楚一抗為何種類/亞類的情況下，可以選用抗相應(yīng)物種IgG。

(3)標(biāo)記物的選擇
一般來(lái)講，耦聯(lián)到二抗上的探針主要有酶(辣根過(guò)氧化酶HRP和堿性磷酸酶AP或其衍生物APAAP，PAP)，熒光基團(tuán)(FITC, RRX, TR, PE)和生物素。選用哪種探針的二抗主要取決于具體的實(shí)驗(yàn)。對(duì)于western blot和ELISA，常用的二抗是酶標(biāo)二抗，而細(xì)胞或組織標(biāo)記實(shí)驗(yàn)(細(xì)胞免疫化學(xué)，組織免疫化學(xué)，流式細(xì)胞術(shù))中通常使用熒光基團(tuán)標(biāo)記的二抗，免疫組化中也可以使用辣根過(guò)氧化酶或堿性磷酸酶標(biāo)記的二抗。如果想要更大程度的放大檢測(cè)信號(hào)，可以使用biotin/avidin檢測(cè)系統(tǒng)。