1. 收到抗體后請務(wù)必在12000rpm離心1-5分鐘后再打開管蓋進(jìn)行分裝和保存(如果抗體體積小于50ul,請延長離心時間至5分鐘,以保證全部抗體均離心下來)!
2. 對于大部分抗體,比較合適的保存方式是分裝后保存在 -20℃ or -80℃ 。
(1)對絕大多數(shù)抗體來說,保存在-20℃是完全足夠了。沒有任何證據(jù)顯示保存在-80℃會有更多的好處!
(2)分裝可以較大程度的降低反復(fù)凍融對抗體活性的損害,同時也降低了由于多次從同一管中吸取抗體造成的污染可能性。
(3)分裝的量以一次實(shí)驗(yàn)用完為好,不能少于10ul每份。因?yàn)榉盅b體積越小,抗體的濃度越可能會受到蒸發(fā)以及管壁吸附的影響
(4)復(fù)融后的分裝抗體如果一次用不完,將剩余母液保存在4℃,避免再凍起來!
(5)抗體工作液應(yīng)該當(dāng)天配制當(dāng)天用完,在4℃ 盡量不要超過1天。
(6)絕對避免將抗體保存在自動除霜冰箱中。盡量將抗體保存在冰箱里層,而不是門上。
3. 大部分抗體收到后4℃短暫保存1-2周對抗體活性是沒有影響的。
如果抗體很快(1-2周)會使用,推薦在4℃保存,這是為了避免反復(fù)凍融對抗體活性的損害。如果要長期保存則是在-20℃ or -80℃。關(guān)鍵的一點(diǎn)是要根據(jù)說明書推薦的方式來正確的保存抗體!
但是,腹水形式的產(chǎn)品請在收到后立即凍起來!因?yàn)樵擃惍a(chǎn)品含有大量的蛋白酶,長期在4℃保存會導(dǎo)致抗體的降解!
4. 大部分抗體的運(yùn)輸條件:一般的運(yùn)輸過程需要1-2周的時間,所以是在4℃的條件下來完成的。
4℃運(yùn)輸最主要的目的是為了避免反復(fù)凍融對抗體活性的損害(如果使用干冰運(yùn)輸,那么收到時抗體是凍起來的,為了分裝就需要解凍。這就多了一次凍融的過程)。所以運(yùn)輸過程中絕對避免干冰運(yùn)輸!
5.特殊抗體的保存條件:
--酶聯(lián)抗體:永遠(yuǎn)保存在4℃,避免凍起來。否則會導(dǎo)致酶活性的下降或者喪失
--偶聯(lián)抗體:所有偶聯(lián)抗體都需要在棕色管中或使用錫箔紙避光4℃保存。尤其是熒光抗體,對光極為敏感,因此在所有的實(shí)驗(yàn)階段也是要避光操作的!
--IgG3的同型對照:永遠(yuǎn)保存在4℃,避免凍起來。因?yàn)槿绻霈F(xiàn)凍融過程,該抗體非常容易形成多聚體無論是保存還是運(yùn)輸,絕對避免反復(fù)凍融!
反復(fù)凍融會導(dǎo)致抗體變性,導(dǎo)致多聚體形成,從而降低抗體的結(jié)合能力!
6.抗體保存其它相關(guān)信息:
(1)關(guān)于加入甘油保存:
有些人會加50%的甘油到抗體中來避免反復(fù)凍融,甘油在-20℃ 會降低冰點(diǎn)。這對很多抗體可能是可行的。加入甘油的溶液不建議在-80℃保存,因?yàn)檫@已經(jīng)超過了甘油的冰點(diǎn)。如果您要加入甘油來保存抗體的話,請謹(jǐn)慎注意無菌操作,避免污染!
(2)關(guān)于蛋白保護(hù)劑:
蛋白在高濃度時更不容易降解(1 mg/ml 或者更高),這就是為什么在抗體中加入BSA之類作為穩(wěn)定劑的原因了;另一方面,加入的蛋白也可以減少抗體由于管壁吸附所造成的損失。但是如果抗體要用來標(biāo)記的話,則不能加入蛋白穩(wěn)定劑,因?yàn)檫@些穩(wěn)定劑會和抗體一起競爭結(jié)合標(biāo)記物。
(3)關(guān)于疊氮化鈉(sodium azide)的使用:
為了防止微生物污染,疊氮化鈉經(jīng)常被加入到抗體中(終濃度0.02% (w/v))。有些抗體已經(jīng)含有了0.02%-0.05%的疊氮化鈉,在說明書的“Storage buffer”中有標(biāo)明的。在下述情況中不能使用疊氮化鈉:
? 如果抗體用于染色或處理活細(xì)胞,用于體內(nèi)研究:疊氮化鈉在抵抗微生物的同時,對其它大部分有機(jī)物也是有毒的,因?yàn)樗钄嗔司€粒體的cytochrome electron transport system.
? 要偶聯(lián)帶有氨基基團(tuán)的抗體:疊氮化鈉會干擾任何含有氨基基團(tuán)的偶聯(lián),因此在進(jìn)行偶聯(lián)之前,應(yīng)將疊氮化鈉去除。偶聯(lián)后的抗體可以加入疊氮化鈉保存,但是濃度只能是0.01%。對于需要偶聯(lián)的抗體,thimerosal (merthiolate)可以替代疊氮化鈉作為保護(hù)劑!
注:疊氮化鈉的去除方式: 可以通過透析或過濾的方式去除!IgG的分子量是150kDa (IgM 是~ 600kDa); 疊氮化鈉的分子量只有65Da。使用cut off 14kDa的濾膜即可將疊氮化鈉從抗體中去除。
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